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Titre :
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Isolement, caractérisation et séquençage de fragments génomiques spécifiques du sexe chez Mercurialis annua L. Codent-ils pour les enzymes spécifiques du sexe ?
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Auteurs :
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Z. Yang ;
UNIVERSITE D'ORLEANS
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Type de document :
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thèse/mémoire
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Année de publication :
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1995
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Format :
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108 p.
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Langues:
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= Français
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Catégories :
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Biologie végétale - Génétique
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Mots-clés:
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ANGIOSPERME
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GENETIQUE
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BIOLOGIE MOLECULAIRE
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ENZYME
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DETERMINATION DU SEXE
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GENE
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SEXE
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ISOLEMENT
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CARACTERISATION
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GENOTYPE
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CLONE
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Résumé :
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Mercurialis annua L. (2n=16) est une Euphorbiacée dioïque dépourvue d'hétérochromosomes morphologiquement identifiables. Le sexe est déterminé par 3 gènes nucléaires à ségrégations indépendantes, A B1 B2. La dissociation des formes dominantes telles Ab ou aB conduit au sexe femelle. Trois lignées de génotype sexuel connu sont utilisées pour isoler les gènes sexuels. Par amplification AP-PCR, nous avons mis en évidence des fragments spécifiques du sexe. Nous avons choisi cette technique en absence de données sur les protéines codées par les gènes sexuels et parce qu'il est impossible d'effectuer le criblage différentiel cDNAs femelle/poly(A+) mâles. Deux amorces sur 40, P04 (5'GTGTCTCAGG) et P03 (5'CTGATACGCC) fournissant répétitivement des profils électrophorétiques à fragments différentiels stables et intenses ont été sélectionnés. Un fragment femelle spécifique de 750bp, 2 fragments mâles spécifiques de 1150bp (issus des mâles résistant et faible) et un fragment de 900bp commun ont été isolés et clonés. Les hybridations Southern montrent que les 3 premiers fragments sont spécifiques du sexe. On retrouve le fragment commun dans le DNA des deux sexes. La séquence du fragment femelle montre 67% d'homologies avec une sous- unité de la polygalacturonase de tomate hydrolysant la liaison b-glycosidique pour libérer du galactose. C'est une confirmation de nos hypothèses car un complexe enzymatique régulateur femelle dont l'activité scinde la liaison b-glycosidique du ribosylzéatine pour libérer la zéatine féminisante a été isolé au laboratoire. Le fragment femelle peut donc coder pour une telle activité. Le séquençage en cours des fragments mâles complétera ces données. En fonction du génotype et des résultats obtenus, nous pouvons penser que le fragment femelle sélectionné est un bon candidat pour être une partie de b2 tandis que le fragment mâle peut être B2.
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Diplôme :
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Thèse de doctorat en biologie et biophysicochimie moléculaire et cellulaire, Université d'Orléans, 1995
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